几种药物抗小鼠弓形虫感染的初步效果

为寻找有效的抗弓形虫药物,选择了临床上使用较多的6种药物进行抗小鼠弓形虫感染初步实验。用刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）长宁株（CN株）速殖子,按1×104/鼠腹腔接种昆明系雄性小白鼠,接种后4 h用药组通过灌服或饮水用药,每鼠剂量分别为阿奇霉素（Azithromycin）150、120、90 mg/（kg·d）,泰妙菌素（Tiamulin）100 mg/（kg·d）,克拉霉素（Clarithromycin）15 mg/（kg·d）,磺胺氯吡嗪钠（Sulfachloropyrazine sodium）150、120、90 mg/（kg·d）,甲硝唑（Metronidazole）150 mg/（kg·d）,甲氧苄胺嘧啶（Trimethoprim）10 mg/（kg·d）,连续用药5~6 d,接种后10 d结束实验。结果阿奇霉素、磺胺氯吡嗪钠组的平均存活天数明显高于感染不用药组（P〈0.05）,泰妙菌素、克拉霉素、甲硝唑、甲氧苄胺嘧啶组在所用剂量下的存活天数与感染不用药组无明显差异（P〉0.05）;用药后4－7 d,取腹腔液镜检速殖子,与感染不用药组相比,阿奇霉素组减少70%以上,磺胺氯吡嗪钠组减少99%以上。研究结果提示,磺胺氯吡嗪钠具有良好的抗弓形虫效果,其推荐剂量与用药疗程还有待进一步研究。     

贵州省猪弓形虫病的血清学调查

为全面了解贵州省猪弓形虫感染情况,对采自9个市（州、地）264个养猪场（户）的2 906份血清用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测猪弓形虫抗体,总体阳性率为65.83%,变化范围为27.88%~85.42%。采集65份猪血清做ELISA和间接血凝试验（indirect heamagglutination assay,IHA）比较测定,两种方法总体符合率为58.46%。IHA方法补充检测177份猪血清,弓形虫抗体阳性率为27.68%。血清学调查结果与国内部分省（市）报道相符。     

弓形虫MIC1蛋白在杆状病毒系统中的表达及活性分析

为构建可溶性表达弓形虫MIC1蛋白质的重组杆状病毒株并分析重组蛋白质的活性，通过PCR扩增弓形虫mic1基因的编码序列并连接到pFastBac 1质粒中，将重组的转移质粒转化DH10Bac感受态细胞，通过蓝白斑筛选获得重组杆粒，转染Sf9细胞后连续培养3代获得重组杆状病毒株。结果显示，Sf9细胞在感染后的第3天出现典型的细胞病变；间接免疫荧光和Western blot试验结果表明MIC1重组蛋白质在感染的Sf9细胞中成功可溶性表达；纯化的MIC1重组蛋白质不仅具有结合唾液酸乳糖的能力，同时能够刺激Balb/c小鼠产生较高水平的特异性抗体（>1∶25 600）。以上结果表明，通过杆状病毒表达系统可获得具有生物学活性的弓形虫MIC1重组蛋白质。     

3种黄芩黄酮物质体外抗弓形虫效果比较试验

为探讨黄芩中主要成分对弓形虫的抑制效果,利用MTT法对黄芩乙醇提取物、黄芩苷、黄芩素进行体外抗弓形虫作用比较试验。结果表明:3种物质均能有效地抑制弓形虫的生长繁殖,其中黄芩素的抗虫效果最好,黄芩乙醇提取物次之,黄芩苷最弱,即黄芩黄酮主要物质中,黄芩素体外抗虫作用最好。     

弓形虫免疫中脾转移因子对免疫细胞的影响

６只健康山羊分别连续注射普通脾转移因子（ＣｏｍｍｏｎＴｒａｎｓｆｅｒｏｒ，ＣＴＦ）及免疫脾转移因子（ＩｍｍｕｎｉｚｅＴｒａｎｓｆｅｒｏｒ，ＩＴＦ）３天后，发现转移因子能提高外周血白细胞总数，促使外周血嗜酸性粒细胞增加，增加外周血Ｔ淋巴细胞和促使外周血淋巴细胞活化等，证明转移因子具有提高机体免疫功能的作用。活虫攻击的结果显示，ＣＴＦ和ＩＴＦ均不能使机体获得完全的保护，但可使弓形虫急性感染向慢性感染转化。     

弓形虫急性感染与小鼠妊娠失败相关性研究

研究弓形虫感染对小鼠妊娠的影响。用免疫组织化学方法测定子宫部分免疫细胞,用酶联免疫吸附法测定子宫匀浆中肿瘤坏死因子 α(TNF α)和白介素 10(IL 10)的含量。发现孕0天和孕6天接种弓形虫,小鼠全部流产。感染组子宫内膜中仅见少量CD8+T淋巴细胞。对照组未见阳性细胞。F4/80+巨噬细胞在感染组小鼠子宫内膜中大量存在。对照组仅见少量F4/80+细胞。细胞因子测定结果表明,TNF α弓形虫感染组子宫匀浆中含量高达76 862±30 354pg/mg蛋白,显著高于正常妊娠7天时小鼠子宫中TNF α的含量(P<0 01)。结果提示,已妊娠母鼠感染弓形虫可引发流产,并与子宫胎儿界面的TNF α分泌增多有关。孕0天感染,孕鼠子宫匀浆上清液中IL 10含量平均值为19 696±9 811pg/mg蛋白,显著低于对照组(48 856±16 518pg/mg,P<0 05)。孕6天感染,子宫匀浆IL 10含量与对照组比较差异不显著(P>0 05)。     

蛋白AG检测多种动物弓形虫抗体AG-ELISA的效果评价

利用建立的可检测多种动物弓形虫抗体的AG-ELISA方法,检测了人工感染及自然感染4种动物血清中的弓形虫抗体.对人工感染猪血清的检测结果表明,AG-ELISA法可于感染后第10天全部检出阳性,早于MAT方法的第14天,其检出率、敏感性及准确度等指标亦优于MAT法.在对临床上304份动物血清检测中,AG-ELISA法对猪、羊血清的阳性检出率高于MAT法,而对犬、猫血清的栓出率则与MAT法相同.Kappa一致性试验表明,AG-ELISA法与MAT法符合良好.上述结果证实AG-ELISA法可用于多种动物弓形虫抗体的检测.     

免疫学技术在弓形虫检测方面的研究概况

弓形虫病是世界分布最广泛的一种人兽共患病,此病在温暖潮湿的地区感染率极高,所以建立高效敏感的检测方法是非常必要的。目前,国内检测弓形虫病的技术有多种,其中以免疫学技术为主。虽然病原学检测方法的敏感性高,特异性强,但其成本高,对人体会产生严重的副作用,所以并不适宜推广。近年来,通过对弓形虫表面抗原的大量研究,检测弓形虫病的免疫学技术也有了显著提高。从敏感性差、操作复杂到现在的特异性强、快速简便,从单一抗原的检测到现在的多表面抗原的检测,无疑为检测弓形虫带来了新的思路。论文主要对检测弓形虫的ELISA、改良凝集试验以及化学发光免疫分析的最新进展进行了综述。     

Detection of Zoonotic Protozoa Toxoplasma gondii and Sarcocystis suihominis in Wild Boars from Spain

Food safety regulations require the control of the presence of protozoa in meats destined for human consumption. Wild boar (Sus scrofa) meat may constitute a source of zoonoses. A 23.8% (688/2881) seroprevalence of anti‐Toxoplasma gondii antibodies and 72.2% (662/910) Sarcocystis sarcocysts prevalence were detected among wild boars hunted in Southwestern areas of Spain. Identity of Sarcocystis spp. was performed by RFLP‐PCR and sequencing, detecting S. miescheriana (7/8) and the zoonotic S. suihominis (1/8). Risk assessment studies of these coccidian in meats destined to human consumption are needed.     

Construction and Identification of Cell Penetrating Peptides VP22 Gene Fused with Enhanced Green Fluorescent Protein and Three Antigens of Toxoplasma gondii

To study a novel vaccine of Toxoplasma gondii,the recombinant plasmids that cell penetrating peptides VP22 gene fused with one enhanced green fluorescent protein（EGFP)(pcDNA-VP22-EGFP)and three antigens of T.gondii（pcDNA-VP22-SAG1,pcDNA-VP22-GRA4 and pcDNA-VP22-AMA1）were constructed,respectively.The recombinant plasmids were identified by PCR,restriction endonuclease digestion and DNA sequencing.The pcDNA-VP22-EGFP plasmid was transfected into COS7 cells,and the expression of VP22-EGFP in COS7 cells was confirmed by fluorescence microscope and RT-PCR.The results showed that all recombinant plasmid were constructed correctly.Green fluorescence was observed successfully under the fluorescence microscope in transfected cells after 72 h.The gene fragment of 1 449 bp was obtained by RT-PCR.The results indicated that the recombinant plasmids were constructed successfully.